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當前位置:首頁 > 產品中心 > 蛋白與免疫 > 顯色成像 > AP34L044/AP34L045EZ ECL 化學發(fā)光液(普通型)

EZ ECL 化學發(fā)光液(普通型)

簡要描述:EZ ECL 化學發(fā)光液(普通型)是一款常規(guī)靈敏度的化學發(fā)光(ECL)HRP底物,可幫助用戶在免疫印跡分析過程中實現(xiàn)10pg的蛋白檢測(~1×10-11g),極其節(jié)省抗體。

  • 產品型號:AP34L044/AP34L045
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2024-08-07
  • 訪  問  量:652

詳細介紹

品牌Life-iLab/李記生物貨號AP34L044/AP34L045
供貨周期現(xiàn)貨應用領域環(huán)保,化工,生物產業(yè),綜合

EZ ECL 化學發(fā)光液(普通型)

產品描述
EZ ECL 化學發(fā)光液(普通型)是一款常規(guī)靈敏度的化學發(fā)光(ECL)HRP底物,可幫助用戶在免疫印跡分析過程中實現(xiàn)10pg的蛋白檢測(~1×10-11g),極其節(jié)省抗體。EZ ECL 底物可為使用辣根過氧化物酶(HRP)偶聯(lián)物的免疫印跡實驗提供明亮的信號和皮克級檢測靈敏度。該底物能夠兼容各種膜、封閉液和寬范圍抗體稀釋液,以出色性能、通用性和高性價比,滿足用戶的免疫印跡應用需求。
EZ ECL 底物的特點:
• 常規(guī)靈敏度:檢測硝化纖維素膜或PVDF膜上10pg的蛋白條帶。。
• 長信號持續(xù)時間:在條件優(yōu)化情況下,經底物孵育的印跡條帶能夠持續(xù)輸出 6~8 h 的可檢測光信號。
• 試劑穩(wěn)定:試劑盒在室溫下可穩(wěn)定放置長達6個月,4℃條件下存放1年不影響使用。
建議稀釋濃度:
• 一抗?jié)舛龋航ㄗh以1mg/mL儲備液起1:1,000-1:5,000 或 0.2-1ug/mL
• 二抗?jié)舛龋航ㄗh以1mg/mL儲備液起1:5,000-1:20,000 或 2.5-10ng
訂購信息

產品名稱 貨號 規(guī)格
EZ ECL 化學發(fā)光液 (普通型) AP34L044 100mL
EZ ECL 化學發(fā)光液 (普通型) AP34L045 500mL

產品組分

貨號 組分 規(guī)格
AP34L044(100mL A 50mL
B 50mL
AP34L045(500mL A 250mL
B 250mL

運輸與保存
藍冰運輸。4℃避光干燥保存,有效期12個月。
使用方法

  1. 取出印記膜,加入合適的封閉液在溫室下孵育20~60min,同時振蕩,以封閉膜上非特異性蛋白結合位點。

  2. 將膜從封閉液中取出,與一抗工作液在溫室孵育1 h,同時振蕩;或在28℃ 孵育過夜,不振蕩。

  3. 將足量的洗滌緩沖液加至膜上,保證緩沖液將膜覆蓋。振蕩孵育≥5 min,更換洗滌緩沖液并重復該步驟4~6次。增加洗滌緩沖液體積,洗滌次數和洗滌時間有助于降低背景信號。【注】:①孵育前,膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會提高洗滌效率。②按前文建議的HRP標記二抗稀釋度非常重要的。

  4. 將HRP標記的二抗工作液與膜在溫室孵育1 h,同時振蕩。

  5. 重復步驟3,以除去未結合的HRP標記二抗。【注】:膜與HRP標記二抗孵育后必須進行洗滌。

  6. 將A溶液與B液等比例混合,制備成工作液。每cm2膜使用0.01~0.1 mL工作液,工作液可以在溫室下穩(wěn)定8 h。【注】:暴露于日光或其他強光下可能損害工作液,為獲得最佳結果,請將此工作液保存在琥珀色瓶中光;實驗室的常見照明不會損害工作液。

  7. 將印記膜在工作液中孵育5 min。從工作液中取出印記膜,并置于一個塑料片或清潔的塑料紙(膜)中,用一張吸水紙吸除多余的液體,并從印記和塑料紙之間小心地壓出氣泡。

  8. 將包在塑料紙(膜)中的印記膜置于膠片暗盒中,蛋白質面朝上,除適用于膠片曝光的燈(如紅色安全燈)之外,關閉所有的燈。【注】:①膠片必須在曝光期間保持干燥;②確保將多余的底物從膜和塑料紙上去除;③在整個膠片處理期間,使用手套。

  9. 將X光膠片置于膜的上面。建議第一次曝光60 s。之后可調整曝光時間以達到最佳結果。化學發(fā)光反應在底物孵育后的前5~30 min期間是烈的。這一反應可以持續(xù)幾個小時,但強度會隨時間下降,如有底物孵育后較長時間后曝光,曝光時間可能需要延長以獲得較強信號。如果使用磷光存儲成像設備(如Bio-Rad的分子成像儀系統(tǒng))或CCD照相機可能需要較長的曝光時間。【注】:膠片與膜之間的任何移動可能在膠片上造成人為的非特異信號。

  10. 使用合適的顯影劑和定影劑對膠片進行顯影。如果信號太強,則縮短曝光時間或將印記膜進行剝離并降低抗體濃度重新檢測。

注意事項

  1. 本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。

  2. 為獲得最佳效果,必須優(yōu)化該系統(tǒng)的全部組分,包括樣品量、一抗和二抗?jié)舛纫约澳ず头忾]試劑的類型。該底物極其敏感,自測李記底物正常使用比大多數他牌底物少得多的樣品、一抗、二抗。

  3. 使用本產品比使用沉淀比色HRP底物檢測所需的抗體濃度低。為優(yōu)化抗體濃度,請進行一次系統(tǒng)的點印跡分析。

  4. 沒有一種封閉試劑對所有系統(tǒng)而言都是最佳的,所以為每一個免疫印跡檢測系統(tǒng)找到最合適的封閉緩沖液非常必需。封閉試劑有可能與抗體產生交叉反應,導致出現(xiàn)非特異性信號。封閉緩沖液同時也會影響系統(tǒng)的靈敏性。當從一種底物轉換為另一種底物時,有時會出現(xiàn)信號衰減或背景增加的現(xiàn)象,原因可能是封閉緩沖液不適合新的檢測系統(tǒng)。

  5. 使用親和素/生*素檢測系統(tǒng)時,避免使用牛奶作為封閉試劑,因為牛奶中含有不定量的內源性生*素,會導致高背景信號。

  6. 保證洗滌緩沖液、封閉緩沖液、抗體溶液和底物工作液的使用體積,以確保在整個實驗過程中印跡膜被液體覆蓋,避免膜變干。增大封閉緩沖液及洗滌緩沖液的使用量可以降低非特異性的信號。

  7. 為獲得最佳效果,在孵育步驟請使用搖床。

  8. 將Tween20(終濃度0.05~0.1%)加入封閉緩沖液和稀釋的抗體溶液,以降低非特異信號。使用高品質的產品,如去污劑。它保存在安瓿中,過氧化物和其他雜質含量很低。

  9. 不要使用疊氮鈉作為緩沖液的防腐劑。疊氮鈉是HRP的抑制。

  10. 避免手與膜直接接觸,實驗過程應戴手套或使用干凈的鑷子。

  11. 所有設備必須清潔且不沾染外來物質。金屬器械(如剪刀)不得具有可見的銹跡。銹跡可能導致斑點形成和高背景。

  12. 底物工作液在室溫下可穩(wěn)定8 h。日光或任何其他強光下可能損害底物,為獲得最佳結果,將底物工作液保存在琥珀色瓶中,并避免長期暴漏在任何強光下,短時間暴漏于實驗室常規(guī)照明不會損害該工作液。

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