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病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞試劑

簡(jiǎn)要描述:病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞試劑,EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑與EZ 慢病毒系列,EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑作為新一代的轉(zhuǎn)染試劑,其轉(zhuǎn)染原理是帶正電的陽(yáng)離子聚合物與核酸中帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用,并通過(guò)胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞。

  • 產(chǎn)品型號(hào):AC04L092
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2024-08-07
  • 訪  問(wèn)  量:3521

詳細(xì)介紹

品牌其他品牌貨號(hào)AC04L092
供貨周期現(xiàn)貨應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合


EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑EZ 慢病毒系列/病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞試劑

轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品描述

EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑作為新一代的轉(zhuǎn)染試劑,其轉(zhuǎn)染原理是帶正電的陽(yáng)離子聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用,并通過(guò)胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞。

產(chǎn)品經(jīng)過(guò)李記生物的優(yōu)化處理,具有轉(zhuǎn)染效率高,細(xì)胞毒性低,操作簡(jiǎn)單,重復(fù)性好,適用范圍廣等特點(diǎn)。

以下為高效轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書,其他產(chǎn)品/病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞試劑詳情請(qǐng)問(wèn)銷售人員。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑與慢病毒訂購(gòu)信息

產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

規(guī)格

價(jià)格

EZ Trans Plus細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑(Ⅱ)

AC04L011

1 mL

690

EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑(高效)

AC04L091

1 mL

300

EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑(高效)

AC04L092

50 mL

3200

EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑(低毒

AC04L098

1 mL

300

EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑(低毒

AC04L099

50 mL

3200

EZ 慢病毒感染增強(qiáng)劑

AC04L432

50 mL

1800

EZ 慢病毒感染增強(qiáng)劑

AC04L433

100 mL

3200

EZ慢病毒濃縮液

AC04L441

50 mL

780

EZ慢病毒濃縮液

AC04L442

100 mL

1280

EZ慢病毒載體凍存保護(hù)液

AC04L452

50 mL

780

EZ慢病毒載體凍存保護(hù)液

AC04L453

10 mL

99

轉(zhuǎn)染試劑運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸4℃保存,有效期12個(gè)月。】:不可冷凍!

高效轉(zhuǎn)染試劑使用方法(以 24 孔板為例,其他培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染請(qǐng)參考表1)

1. 接種細(xì)胞

對(duì)于貼壁細(xì)胞,轉(zhuǎn)染前18-24 h進(jìn)行鋪板(不含抗生素),使其在轉(zhuǎn)染時(shí)的密度大約在80%左右。對(duì)于懸浮細(xì)胞,轉(zhuǎn)染當(dāng)天,配制EZ Trans-DNA復(fù)合物之前進(jìn)行鋪板,每500 µL生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入4~8×105cells。  

【注】:培養(yǎng)液中的血清不影響轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響,建議初次使用時(shí)設(shè)置梯度進(jìn)行優(yōu)化最佳使用量。

2. 準(zhǔn)備EZ Trans-DNA復(fù)合物

1對(duì)于每孔細(xì)胞,將1 μg質(zhì)粒DNA稀釋到40 μL無(wú)血清的高糖DMEM培養(yǎng)基(或者OPTI-MEM Ⅰ 培養(yǎng)基),混勻。

2對(duì)于每孔細(xì)胞,將3 μL EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑稀釋到40 μL無(wú)血清的高糖DMEM培養(yǎng)基(或者OPTI-MEM Ⅰ 培養(yǎng)基),輕輕混勻。

【注】:無(wú)血清的高糖DMEM培養(yǎng)基是稀釋液,不能使用含血清的培養(yǎng)基進(jìn)行DNA和EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑的稀釋因?yàn)?/span>EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成過(guò)程不能含有血清。

3將稀釋好的EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中,輕輕混勻。

【注】:此混合的順序不能反向進(jìn)行

4室溫放置10-15 min,以形成EZ Trans-DNA復(fù)合物。

3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞

1將上述80 μL EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻滴入到含細(xì)胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿或輕微振蕩,讓EZ Trans-DNA復(fù)合物分散均勻。

237℃,5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)6-18 h,去除含EZ Trans-DNA復(fù)合物的培養(yǎng)液,更換新的培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)至對(duì)轉(zhuǎn)入基因表達(dá)分析。

【注】:篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,轉(zhuǎn)染細(xì)胞24 h后,將細(xì)胞傳代至新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中(將細(xì)胞稀釋10倍以上),在37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h,加入篩選培養(yǎng)基。在有轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下,約 1~2周可篩選到耐藥性克隆,在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

注意事項(xiàng)

  1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

  2. 質(zhì)粒質(zhì)量:請(qǐng)務(wù)必使用高純度無(wú)內(nèi)毒素轉(zhuǎn)染級(jí)質(zhì)粒。通過(guò)260 nm光吸收測(cè)定DNA 濃度,260 nm / 280 nm比值確定 DNA 純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,請(qǐng)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的完整性。

  3. 細(xì)胞條件:使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保細(xì)胞沒(méi)有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用胎牛血清(貨號(hào):AC03L055)培養(yǎng)細(xì)胞。

  4. 細(xì)胞培養(yǎng)液要求:EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染,并且轉(zhuǎn)染前不需要換培養(yǎng)基。但是,制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)要求用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑,因?yàn)檠鍟?huì)影響復(fù)合物的形成。確保細(xì)胞培養(yǎng)液沒(méi)有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。轉(zhuǎn)染時(shí)培養(yǎng)液中不添加抗生素。

  5. DNA濃度和EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑量的優(yōu)化:DNA濃度和轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響,初次使用應(yīng)優(yōu)化DNA濃度和轉(zhuǎn)染試劑量以得到最大的轉(zhuǎn)染效率。使用者可嘗試每 1 μg DNA使用 1~4 μL體積EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。DNA和轉(zhuǎn)染試劑的比例,通常推薦是1:2~1:5。

    1:不同培養(yǎng)體積對(duì)應(yīng)的待轉(zhuǎn)DNA、EZ Trans、稀釋液用量

培養(yǎng)器皿

培養(yǎng)液體積(mL)

DNA量(μg)

EZ Trans (μL)

稀釋液(μL)

48孔板

0.3

0.5

1.5

2 × 25

24孔板

0.5

1

3

2 × 40

12孔板

0.75

1.5

4.5

2 × 60

6孔板

1

3

9

2 × 125

35 mm培養(yǎng)皿

1

3

9

2 × 125

60 mm 培養(yǎng)皿

3

6

18

2 × 250

100 mm 培養(yǎng)皿

9

12

36

2 × 500

【注】:該表使用量?jī)H供參考,具體使用量還需根據(jù)細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化。使用時(shí)DNA(μg): EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑(μL)比值保持在1:2~1:5。

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